- La
culture discontinue :
- Erlenmeyer
250 mL contenant 100 mL de milieu LB
- composition
du milieu LB pour 1L :
Tryptone
Extrait de levure
NaCl |
|
10g
5g
10g |
|
- Inoculum :
culture d'une nuit d'Escherichia coli en milieu LB ensemencement
à raison de 5% (v/v)
- Spectrophotomètre
réglé sur 600 nm, semi microcuves à usage unique
- Bain thermostaté
à agitation
- La
méthode :
- Paramètres
de la fermentation :
- Température
: 30°C
- Agitation
: 180 mpm
- Effectuer
un suivi individuel toutes les 30 minutes
- Les
résultats :
| temps
(min) |
0 |
30 |
60 |
90 |
120 |
150 |
180 |
| T lu
à 600 nm |
0,035 |
0,077 |
0,135 |
0,325 |
0,565 |
0,377
|
0,25 |
| facteur
de dilution |
1 |
1 |
1 |
1 |
1 |
2 |
4 |
| T réel |
0,035 |
0,077 |
0,135 |
0,325 |
0,565 |
0,754 |
1,00 |
| Ln T |
-3,35 |
-2,56 |
-2,00 |
-1,12 |
-0,57 |
-0,28 |
0 |
remarque :
Trouble limite à 600 nm : 0,6 uA
Le suivi de
la croissance se fait en observant la vitesse de croissance au
cours du temps, cette vitesse s'exprime de la façon suivante
:
µx(t) = dX/X.dt = X'/X =
cette vitesse peut se
calculer à chaque instant, en fonction de ses variations
on discrimine différentes phases de croissance.
- Détermination
des phases de la croissance
: Courbe Ln(T600) = f(t) :
- Pour déterminer
les phases, il faut tracer les tangentes à la courbe : Ln(T)
= f(t).
- Sur la durée
de l'expérience on observe uniquement deux phases :
- phase exponentielle
de 0 à 115 min : tangente dont la pente est la plus forte
- phase de
ralentissement de 115 min à 180 min
- Détermination
des paramètres de la croissance
: Courbe
Ln(T600) = f(t) :
- vitesse
spécifique maximale de croissance : µxmax = DLnT/dt
pendant la phase exponentielle :
pente de la tangente à la courbe : Ln(T600) = f(t)
µxmax = 1,40 h-1
- G : temps
de génération : temps de doublement de la population,
temps de doublement du trouble :
G = Ln2/ µxmax = 30 min
|